Fundamentos de Engenharia Genética

A Engenharia Genética permite manipular directamente os genes de determinados organismos com objectivos práticos. Tem várias aplicações e técnicas utilizadas.

A Engenharia Genética tem como objectivo a manipulação directa de genes com um fim prático, ou seja,  os genes isolados e transferidos, são responsáveis pela produção de certas substâncias , como as proteínas, para que outros seres vivos que nãos as produzam , de modo a serem funcionais nestes seres vivos. 

Técnica do DNA recombinante

+ Aplicam-se as enzimas de restrição no vector ( plasmideos ou bacterifagos) e no DNA de origem, que contêm o gene de interesse.

+ Coloca-se o vector e o gene em contacto, usam-se as ligases do DNA, para promover a ligação.

+  Promove-se a incorporação do vector por parte das bactérias. As bactérias crescem num meio de cultura selectivo.

+ Das bactérias que forem cultivadas num meio com esse antibiótico, selecciona-se só as que têm o plasmideo recombinante se reproduzem, formando colónias.

+ Purificação – separação do composto de interesse de outros produzidos pelo metabolismo normal do hospedeiro.

Técnica do DNA complementar

Usa-se em conjunto com a técnica do rDNA. Permite obter DNA maduro, já sem intrões. O processo de obtenção de DNA, utiliza-se:

+ mRNA maduro

+ Transcriptase reversa- usa o mRNA como molde para fazer uma cadeia de DNA por complementaridade de bases à o mRNA degrada-se ( é instável).

+ Nucleótidos livres.

+ DNA polimerase à usa  a cadeia simples e os nucleótidos do meio para sintetizar a cadeia em falta:

             - Promove-se a replicação;

             - Insere-se no vector; 

Técnica de reacção de polimerização em cadeia (PCR)

Um ciclo de PCR consiste em quatro fases:

+ Aquecer o DNA para separar as duas cadeias;

+ Acrescentam-se primers, que se vão ligar ao DNA em pontos específicos, delimitando a zona a copiar;

+ Adicionar nucleótidos e a enzima DNA polimerase para que a dupla hélice se reponha a partir de cada uma das cadeias simples;

+ Repetir o procedimento até obter cópias suficientes do DNA em estudo;

Técnica que permite amplificar qualquer porção de DNA fora das células.

Bibliotecas de Genes ou Genómica

O processo de multiplicação dos organismos que contêm rDNA, permite não só  a produção da substância codificada pelo gene inserido, como também a clonagem desse gene. Os investigadores conservam assim, cópias desses genes, estando armazenados, ficam assim disponíveis para posteriores utilizações.